- تلف الخلايا: قد تؤثر عمليات الفصل الفيزيائي أو الإنزيمي على شكل ووظيفة الخلايا. خصوصاً، قد تتغير علامات سطح الخلية. الحل: من خلال اختيار طريقة فصل مناسبة وتقليل وقت المعالجة قدر الإمكان، يمكن تقليل تلف الخلايا.
- فصل غير كامل: ليس كل أنواع الأنسجة والخلايا تتم فصلها بكفاءة متساوية. الحل: من المهم اختيار بروتوكول الفصل المثالي الذي يتناسب مع خصائص العينة.
- فقد التفاعل بين الخلايا: في حالة in vivo، التفاعل بين الخلايا والبيئة المحيطة بها له دور مهم. الحل: يمكن استعادة بعض التفاعلات بين الخلايا من خلال زراعة الخلايا المشتركة أو زراعتها تحت ظروف معينة.
- تأثير الخلايا الميتة: قد تزيد أعداد الخلايا الميتة خلال عملية الفصل، وهذا قد يؤثر على نتائج التحليل. الحل: من خلال النظر في مجموعات إزالة الخلايا الميتة أو زراعة الخلايا بتركيز مناسب، يمكن تقليل تأثير الخلايا الميتة.
- الضوضاء الخلفية: مع فصل الأنسجة، قد تكون هناك بقايا خلوية أو قطع صغيرة في العينة. الحل: من خلال إجراء عمليات الطرد المركزي المناسبة والترشيح، يمكن إزالة البقايا الخلوية والقطع الصغيرة.
- تقلبات في تعبير العلامات: عند فصل الخلايا من حالة in vivo، قد تتغير تعبيرات علامات سطح الخلية أو الجزيئات داخل الخلية. الحل: من خلال تحليل الخلايا بسرعة بعد الفصل أو تحسين ظروف التخزين، يمكن تقليل التقلبات في التعبير.
- قيود الوقت: خصوصًا عند التعامل مع عينات الإنسان أو الحيوان، إذا كان هناك وقت طويل بين جمع العينة والتحليل، قد تتغير حالة الخلايا. الحل: من المهم تحسين عملية جمع العينات إلى التحليل وإتمام المعالجة في أقل وقت ممكن.
- قيود العينة: بعض الأنسجة أو الخلايا قد تكون صعبة الفصل أو التحليل. الحل: من المهم الرجوع إلى الأدبيات أو الدراسات المنشورة واختيار الطريقة المناسبة للعينة المعنية.
- تعقيد التحليل المتعدد الألوان: عند استخدام العديد من الفلوروكرومات في نفس الوقت، قد تحدث مشكلات في تداخل الطيف أو في التصحيح. الحل: من خلال تصحيح تداخل الطيف واختيار الفلوروكروم المناسب، يمكن إجراء تحليل دقيق.
الختام: تقنية الفلو سايتومتري هي أداة قوية جدًا وبالنظر إلى الأسلوب والنقاط التي يجب مراعاتها، يمكن الحصول على بيانات عالية الجودة. يرجى الرجوع إلى القيود والحلول المذكورة أعلاه للحصول على تحليل أكثر موثوقية.
